· polyacrylamidegel ຕ້ອງໂດຍ acrylamide monomer, ວັດສະດຸເລີ່ມຕົ້ນ polymerization, catalyst, ແລະສິດທິຂອງເກືອແລະ buffer ປະສົມຮ່ວມກັນ.
· ອາຄຼີລາມິດແລະ BIS (N, N '- methylene double acrylamide) ແມ່ນ monomer form gel matrix.
· ammonium persulfate ເລີ່ມຂະບວນການ polymerization ກາວ.ການສ້າງກາວຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການແກ້ໄຂ ammonium persulfate 10% ກະກຽມໃນນ້ໍາ.ຂໍ້ມູນສ່ວນໃຫຍ່ຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການນໍາໃຊ້ຢ່າງຫ້າວຫັນ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການແກ້ໄຂ 10% ສາມາດຖືກວາງໄວ້ທີ່ 4 ℃ສໍາລັບຫຼາຍໆອາທິດໂດຍບໍ່ມີການສູນເສຍກິດຈະກໍາຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ເຮັດໃຫ້ເຖິງ 10 ມລແລະປະຖິ້ມເມື່ອກາວບໍ່ສາມາດລວບລວມໄດ້.
ຄໍາແນະນໍາ: ອັດຕາສ່ວນຂອງອາຄຼີລາມິດໃນການຈັດລໍາດັບກາວແລະກາວທາດໂປຼຕີນແມ່ນບໍ່ຄືກັນ.ຖ້າໃຊ້ acrylamide premade: BIS solution, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າໄດ້ຮັບຂວດທີ່ຖືກຕ້ອງ.
· TEMED (N, N, N ', N' - tetramethyl ethylenediamine) ເປັນ catalyst, ໃນຂວດສີນ້ໍາຕານ, ວາງໄວ້ໃນຕູ້ເຢັນ.ຕື່ມພຽງແຕ່ກ່ອນທີ່ຈະ pouring ກາວ.
· polyacrylamide electrophoresis ແກ້ວທີ່ໃຊ້ໃນ electrophoresis ຄວນຖືກລ້າງກ່ອນແລະຫຼັງແຕ່ລະຄັ້ງ.ຫຼັງຈາກ electrophoresis, ລ້າງດ້ວຍແປງອ່ອນແລະຜ້າໃນນ້ໍາສະບູຮ້ອນ, ລ້າງອອກດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນແລະຢືນໃຫ້ແຫ້ງ.
· ຄວາມຊຸ່ມ ແລະຂີ້ຝຸ່ນສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດມີໂພລີເມີຮູ.ກ່ອນທີ່ຈະ electrophoresis, ເຮັດຄວາມສະອາດແຜ່ນແກ້ວດ້ວຍເຄື່ອງເຮັດຄວາມສະອາດແກ້ວແລະເຊັດດ້ວຍແປງອ່ອນໆ.ລ້າງດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນແລະແຫ້ງຢ່າງລະອຽດດ້ວຍເຊັດເຈ້ຍ.ການລ້າງດ້ວຍເອທານອນ 70% ກ່ອນທີ່ຈະເຊັດດ້ວຍເຈ້ຍຈະຊ່ວຍເຮັດຄວາມສະອາດແລະເລັ່ງການແຫ້ງ.ເພີ່ມຕົວຢ່າງຂອງ acrylamide ຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ: BIS, ນ້ໍາ, buffer solution, ammonium persulfate, TEMED.ສັ່ນໃຫ້ດີແລະຖອກລົງທັນທີ.
ມັນບໍ່ຈໍາເປັນທີ່ຈະ degass polyacrylamide ກ່ອນທີ່ຈະ polymerization.(Acrylamide ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອບັນຈຸຢູ່ໃນສູນຍາກາດເພື່ອເອົາຟອງອອກເພາະວ່າອົກຊີເຈນ inhibits polymerization.)
ຄໍາແນະນໍາຕົວຢ່າງຈຸດກາວແນວນອນ.
· ເອົາເຈ້ຍສີດຳໃສ່ໃນກ່ອງລຸ່ມ, ພື້ນຫຼັງສີດຳເພື່ອເຮັດໃຫ້ບາງຮູຕົວຢ່າງເຫັນໄດ້ຊັດເຈນຂຶ້ນ.
· ກາວ tank ເຕັມ buffer, ພຽງແຕ່ໃນໄລຍະ colloid ໄດ້.
· ຖ້າຂອບມີແສງສະຫວ່າງ, ເປີດໄຟ, ໃຫ້ແສງສະຫວ່າງສ່ອງ colloid.ແຕ້ມຕົວຢ່າງເຂົ້າໄປໃນ pipette.
· ການນໍາໃຊ້ອຸປະກອນທໍ່ອັດຕະໂນມັດ.
· ໃນ 10-200 mu 1 ຈຸດເຄື່ອນທີ່ຂອງແຫຼວສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນຈຸດຫຼາຍທີ່ສຸດໃນຕົວຢ່າງ.ສໍາລັບຂຸມຕົວຢ່າງຂະຫນາດນ້ອຍຫຼາຍ (ຫນ້ອຍກວ່າ10μ1), ຫົວ pipette ຍາວທີ່ໃຊ້ສໍາລັບກາວລໍາດັບແມ່ນສະດວກກວ່າ.
· ທໍ່ພຽງແຕ່ຈຸ່ມຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ, ຫາຍໃຈເອົາຂອງແຫຼວທີ່ເຄື່ອນຍ້າຍຊ້າໆ.ຕົວຢ່າງອາດຈະຕິດກັບ glycerin, ແລະການສູບນ້ໍາຢ່າງໄວວາອາດຈະດຶງຟອງອາກາດເຂົ້າໄປໃນຫົວ pipette.
· ຕົວຢ່າງຫຼັງຈາກຫາຍໃຈເອົາຫົວທໍ່ທໍ່, ຈະຍ້າຍຫົວຂອງນ້ໍາຄ່ອຍໆໃສ່ຂອບຂອງທໍ່ຫຼືເຈ້ຍເຊັດຈະດູດຫົວຂອງແຫຼວອອກນອກຂອງຢອດ.ຈົ່ງລະມັດລະວັງບໍ່ໃຫ້ດູດຕົວຢ່າງ.
ເອົາຕົວຢ່າງເຂົ້າໄປໃນຂຸມຕົວຢ່າງ
·ອຸປະກອນທໍ່ເພື່ອຮັກສາຄວາມກົດດັນເລັກນ້ອຍ, ເຮັດໃຫ້ຕົວຢ່າງເລັກນ້ອຍເຄື່ອນຍ້າຍຫົວຂອງແຫຼວ overflow.
· ຫົວທໍ່ທໍ່ທີ່ໃສ່ເຂົ້າໄປໃນ buffer, ເລັກນ້ອຍສູງກວ່າຮູຈຸດ, ຮັກສາຄວາມກົດດັນໃນທາງບວກ.ປາຍຂອງທໍ່ທໍ່ສາມາດຖືກໃສ່ເຂົ້າໄປໃນຂຸມຂະຫນາດນ້ອຍ.
· ຊ້າໆ ແລະ ຄົງທີ່ຕົວຢ່າງອອກມາ.ປາຍ pipette ຖືກວາງໄວ້ຂ້າງເທິງຂຸມຕົວຢ່າງຈຸດ, ແລະຕົວຢ່າງຈະຈົມລົງໃນຂຸມ.ໃຫ້ຕົວຢ່າງຈົມລົງເພື່ອຕື່ມຂຸມຕົວຢ່າງແທນທີ່ຈະຍູ້ເຂົ້າໄປໃນ.
· ເມື່ອການຫຼຸດລົງສຸດທ້າຍຂອງຕົວຢ່າງທີ່ມີຫົວຂອງແຫຼວ, ແຫຼວຈະຍ້າຍໄປຂາທີສອງ, ຄ່ອຍໆຍົກຂອງແຫຼວ, ຍ້າຍອອກຈາກ buffer.
ວິທີການເຮັດຕົວຢ່າງກາວແນວຕັ້ງ?
· ຈຸດກາວແນວຕັ້ງ ຂຸມຕົວຢ່າງທີ່ສ້າງຂຶ້ນລະຫວ່າງສອງຕ່ອນຂອງແກ້ວ.ໃນກາວບາງໆ, ຫົວ pipette ບໍ່ສາມາດໃສ່ໄດ້ລະຫວ່າງສອງແຜ່ນແກ້ວ.ເບິ່ງ glycerin ໄດ້!ເອົາຫົວ pipette ຢູ່ເທິງຂຸມຕົວຢ່າງແລະຕົວຢ່າງຈະຈົມລົງໃນຂຸມ.
·ຈຸດຕົວຢ່າງກ່ອນ, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເອົາຈຸດຕັ້ງຂອງ polypropylene acyl gel ຂຸມຕົວຢ່າງຖືກລ້າງໃຫ້ສະອາດ.ລ້າງ acrylamide unpolymerized ແລະນ້ໍາທີ່ອາດຈະປາກົດຢູ່ດ້ານລຸ່ມຂອງຂຸມຕົວຢ່າງ.ນ້ໍາສາມາດເຮັດໃຫ້ຂຸມຕົວຢ່າງນ້ອຍລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ໃຊ້ syringe 25ml ຫຼື 50ml ແລະເຂັມ 18-gauge.ຖອກໃສ່ຕົວປ້ອງກັນ electrophoresis ແລະລ້າງຮູຕົວຢ່າງຢ່າງລະມັດລະວັງ.
·ມັນສາມາດເປັນການຍາກທີ່ຈະເຫັນຮູຕົວຢ່າງ, ແຕ່ໃນເວລາດຽວກັນ, ສ່ວນທີ່ເຫຼືອແມ່ນງ່າຍ.ຖ້າມີຮູເກີນ, ຕົວຢ່າງ buffer ສາມາດທົດສອບດ້ວຍ bromophenol blue.
ເວລາປະກາດ: 31-03-2023